导读：今天下午，检验科曹阳老师在本院神内2科送检的一份脑脊液标本中找到隐球菌，菌体数量多、形态典型。手机拍得图片如下：
在黑暗中寻找光明，是我们是在墨汁中寻找隐球菌的形象比喻。
一、新型隐球菌的特点
新型隐球菌广泛分布于自然界中，鸽子粪是主要传染源。圆形、卵圆形，菌体为宽厚的荚膜包裹；不形成菌丝和孢子；出芽生殖。分A、B、C、D四个血清型。A型最多见。致病菌属包括17个种和8个变种，主要是新型隐球菌新生变种和格特变种，已报道引起人类疾病的还有浅黄隐球菌、浅白隐球菌和罗伦隐球菌，但是很少见。
二、致病性
新型隐球菌为条件致病菌，免疫功能低下者为高发人群，但也可发生在免疫功能正常人。白血病、恶性肿瘤、艾滋病、SLE、尿毒症患者。长期广谱抗生素、激素、免疫抑制剂使用者更易感染。
隐球菌侵入肺部后，局部病变进展缓慢，病变轻微，常无临床症状，但有20%以上的病例可由此经血进入中枢神经系统，导致隐球菌性脑膜炎的发生。
三、临床表现
（一）起病缓慢、可呈亚急性，潜伏期2-4周。
（二）脑膜炎的表现：意识障碍，头痛、发热（以不规则热多见）。
（三）颅内压的表现，可有颅神经损害。
（四）未经治疗病情逐渐恶化
（五）血常规正常
（六）腰穿：压力增高明显，脑脊液外观透明或微混，白细胞轻中度增多（40-/ul)，以淋巴细胞为主。蛋白轻度升高，糖减低，氯化物轻中度减低。
四、诊断
对于临床上出现CNS感染的症状、体征、脑脊液压力明显增高及糖含量明显下降的患者，应高度警惕隐球菌脑膜炎的可能，尤其对具有免疫功能底下者、有养鸽或有鸽粪接触史者，更应高度怀疑。实验室检查具有重要的诊断价值，包含涂片镜检、培养、隐球菌特异性抗原检测和组织病理检查发现隐球菌。
五、实验室检查
（一）CSF的涂片
革兰氏染色：将临床送检的CSF标本g离心5分钟，将沉淀物进行涂片、墨汁染色及真菌培养，用上清夜做新型隐球菌抗原的检测。一定要离心，容器要选择能离心的无菌塑料试管，避免二次污染。
ppt14的图片显示的是隐球菌革兰氏染色镜下形态，可见黑色的孢子，以及夹膜抗原。
（二）CSF的墨汁染色
1.方法
（1）用离心后的沉淀物进行墨汁染色。
（2）墨汁与脑脊液比例一定要合适，一般选1：2的比例。
（3）选用优质墨汁。
重视墨汁染色，墨汁染色阳性可以直接向临床报告检测到新型隐球菌。
2.CSF的墨汁染色隐球菌的形态
取可疑标本置玻片上，加1滴墨汁混匀后加盖片镜检。墨汁染色检测隐球菌对于早期诊断隐球菌性脑炎十分重要，但墨汁染色检测隐球菌镜下形态要注意与单核细胞的区别，隐球菌本身并不被染上墨汁，但在黑色背景下为5-20μm，圆或卵圆形，有宽阔透明的荚膜，菌体周边显现为强的折光形成一个折光环，中心部分为折光性较强的颗粒状或条状物质，也能见到单芽孢子，出芽孢子的颈粗细不一，当母子细胞尚未完全分离时同样可见荚膜沟通，无假菌丝。
（三）CSF的真菌培养、鉴定、及药敏试验
1.真菌培养及鉴定
（1）培养基内可加氯霉素，但不可加放线菌酮，因后者抑制本菌生长。
（2）新型隐球菌的菌落特征：SDA25°奶油色酵母菌落，有时黄色或带粉色。
（3）显微镜特征:SDA25°球菌或椭圆形酵母菌细胞，第一代培养物有时可见小的荚膜。继代培养物不见荚膜。
（4）生理生化检测：用沙氏培养基上分离出的纯菌落制成0.5个麦氏单位悬液，充填API20cAUX真菌鉴定条（购自生物梅里埃公司），置35℃培养24-72h后进行判度。
2.药敏试验
用ATBFUNGUS3真菌药敏试剂条（购自生物梅里埃公司）进行药敏测定。
（四）隐球菌抗原的检测
1.试验原理
用抗隐球菌抗体包被的乳胶颗粒和脑脊液中存在的隐球菌夹膜多糖抗原的标本反应，发生凝集，对血清标本使用裂解酶处理，减少非特异性干扰。标本类型包括CSF、血清（肺隐球菌病及其它隐球菌病）、支气管盥洗液等。
2.临床意义
新型隐球菌抗原的检测非常重要，对于早期诊断隐球菌脑炎有重要价值，临床上一部分病人在就诊初期未能及时得到病原学证据，成为本病容易漏诊的最常见原因。目前国外已用乳胶凝集试验代替了一般的墨汁染色，使诊断的敏感性和特异性明显提高，可以达到95%以上。
隐球菌感染的金标准是真菌培养，但敏感性不高，并且隐球菌经过抗生素治疗后很难再培养出来，墨汁染色虽然方法简便，但受菌量多少影响较大，并且治疗后菌体出现退行变，不易辨别。
曹阳赞赏
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